CST TECH TIPS 系列课程
1 根据样本类型和实验应用选择裂解液(Cell Lysis Buffer, RIPA Buffer 或 SDS Buffer)
2 超声和离心在制备WB样本中非常重要
对于膜溶解和蛋白间结合,某些试剂(如去垢剂)可能过于温和或强烈。因不同实验需求不同,使用的缓冲液也不同。比如,RIPA Buffer不适合于ELISA实验,因为它会影响抗体的结合。
对于制备全细胞裂解液,我们推荐使用Cell Lysis Buffer,RIPA Buffer,或SDS。
Cell Lysis Buffer,优点在于其适用性广,不含强变性剂。变性剂可使目的蛋白变性。
RIPA Buffer,包括 NP40和脱氧胆酸钠(Sodium deoxycholate),我们一般推荐其用于组织蛋白的提取,因为它是一种可以溶解核膜的强缓冲液。
当你使用任何一种裂解缓冲液时,为了更多更好的获得你的目的蛋白,超声和离心非常重要,它可以帮助移除细胞碎片。
SDS,也可以被用于制备全细胞裂解液,但在某些实验中,它能造成干扰。你必须知道SDS会干扰蛋白定量的实验,所以我们一般推荐用Cell Lysis Buffer或RIPA Buffer裂解细胞,再用SDS Buffer稀释。
请一定记住,无论您使用何种裂解液,超声在样本制备中非常关键!它能保证充分的核破碎,DNA剪切,及最佳的蛋白回收率。且离心可以帮助移除细胞碎片。